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分離膠對(duì)血清中HBV DNA測(cè)定結(jié)果的影響

當(dāng)前分析
分離膠促凝劑真空負(fù)壓采血管不僅填充有進(jìn)口分離膠，而且在采血管內(nèi)壁上均勻涂布有促凝劑，因此可大大縮短血液凝固時(shí)間。進(jìn)口分離膠對(duì)血清中的蛋白的吸附能力低，穩(wěn)定性強(qiáng)，離心后的分離膠固化形成屏障，平整地將血清與血細(xì)胞完全分離，能夠有效阻止血清和血細(xì)胞間的物質(zhì)交換，從而有利于獲得高質(zhì)量的血清，使血液檢測(cè)的結(jié)果更加真實(shí)，也有利于提高血清的收集率。目前分離膠促凝劑真空負(fù)壓采血管主要用于以血清標(biāo)本為檢測(cè)對(duì)象的臨床生化檢驗(yàn)、免疫學(xué)檢驗(yàn)等。但對(duì)分離膠促凝劑真空負(fù)壓采血管與普通第二代促凝劑采血管所采集全血標(biāo)本，并在分離血清后以血清作為檢測(cè)對(duì)象進(jìn)行 乙 型 肝 炎 病 毒DNA 熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)測(cè)定結(jié)果差異的相關(guān)研究較少。為了探討分離膠對(duì)血清中HBV DNA測(cè)定結(jié)果的影響，筆者進(jìn)行了相關(guān)對(duì)比試驗(yàn)和分析，結(jié)果報(bào)道如下。

資料與方法
隨機(jī)選取90例本院住院和門診乙型肝炎乙肝患者其中男52例女38例平均年齡(45歲)每例患者采用2種采血管進(jìn)行全血標(biāo)本采集，患者在接受1次靜脈穿刺后分別用2種采血管采集全血標(biāo)本，其中分離膠促凝劑真空負(fù)壓采血管為試驗(yàn)組，未添加分離膠的普通第二代促凝劑真空負(fù)壓采血管為對(duì)照組各采集3mL靜脈血標(biāo)本。

耗材：
采用統(tǒng)一的不同類型一次性人體靜脈血采集管

方法：
90例患者分別用分離膠促凝劑真空負(fù)壓采血管和促凝劑真空負(fù)壓采血管，同時(shí)各無(wú)菌采集空腹靜脈血,3mL分離膠促凝劑真空負(fù)壓采血管采血后立即180度輕輕顛倒混勻5-6次室溫放置20分鐘后，8cm為離心半徑3500r/min離心10min。將以上各組來(lái)源的血清標(biāo)本分別按HVB檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行HBV DNA定量擴(kuò)增檢測(cè)。所測(cè)結(jié)果用拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)值表示。（2）HBV DNA提取和擴(kuò)增： 直接吸取血清:100L，加等量的DNA濃縮液充分混勻，5cm為離心半徑12000r/min離心10min,棄上清液,加20LDNA提取液充分混勻,100度金屬浴10min前后誤差不超過(guò)1min,靜置6-8h以5cm為離心半徑10000r/min離心5min,取上清液5l做PCR反應(yīng)。將點(diǎn)好樣的反應(yīng)管放入PCR儀上，93度2min預(yù)變性,然后按10個(gè)循環(huán)。每批PCR試驗(yàn)均同時(shí)檢測(cè)陰陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)本和臨界陽(yáng)性標(biāo)本。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理!采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行配對(duì)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理；采用配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果比較,p〈0.05時(shí)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

結(jié)果

分離膠促凝劑真空負(fù)壓采血管與普通第二代促凝劑真空負(fù)壓采血管分離血清進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果見表。討論

隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，乙肝患者的血清學(xué)檢測(cè)已經(jīng)從以常規(guī)的“兩對(duì)半”檢測(cè)間接反映患者體內(nèi)病毒是否復(fù)制，開始轉(zhuǎn)向血清學(xué)的HBV DNA檢測(cè)。乙肝對(duì)人類危害性極大，病毒的活躍復(fù)制則是啟動(dòng)或激發(fā)肝臟組織炎性反應(yīng)的因素，因此從HBV DNA定量的角度檢測(cè)對(duì)臨床診斷和評(píng)價(jià)病毒復(fù)制水平有十分重要的意義。目前臨床上絕大多數(shù)都是以分離自用普通第二代促凝劑真空負(fù)壓采血管所采集的全血標(biāo)本的血清進(jìn)行HBV DNA檢測(cè)，所以本研究選擇該種采血管作為對(duì)照組。FQ-PCR技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上添加了熒光標(biāo)記探針，在無(wú)特異性PCR發(fā)生時(shí)，熒光信號(hào)不改變；當(dāng)有特異性PCR擴(kuò)增時(shí)，熒光信號(hào)增強(qiáng)。在FQ-PCR檢測(cè)過(guò)程中，實(shí)時(shí)檢測(cè)反應(yīng)體系中熒光信號(hào)的變化，參照陽(yáng)性梯度標(biāo)準(zhǔn)品，由電腦自動(dòng)計(jì)算出樣品起始DNA定量結(jié)果。由于分離膠技術(shù)不斷得到推廣，分離膠促凝劑真空負(fù)壓采血管在臨床檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)工作中得到廣泛應(yīng)用。但分離膠促凝劑真空負(fù)壓采血管分離血清后對(duì)HBV DNA檢測(cè)結(jié)果的影響相關(guān)報(bào)道很少。本研究結(jié)果顯示，使用分離膠促凝劑真空負(fù)壓采血管的90例乙肝患者血清HBV DNA的檢測(cè)結(jié)果對(duì)數(shù)值為,4.92+-0.19使用普通促凝劑真空負(fù)壓采血管時(shí)乙肝患者血清HBV DNA的檢測(cè)結(jié)果對(duì)數(shù)值為；經(jīng)配對(duì)檢驗(yàn)分析比較，兩者間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義p0.05。因此使用分離膠促凝劑真空負(fù)壓采血管不會(huì)對(duì)HBV DNA檢測(cè)產(chǎn)生影響，而分離膠促凝劑真空負(fù)壓采血管有利于更快速地分離血清進(jìn)行HBV DNA檢測(cè)，能大大提高工作效率，值得在臨床PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室中廣泛